PCR实验室分区隔离原因(PCR实验室污染怎么办)

为什么PCR实验室要分区隔离?

　　依据国家法规，在专业的PCR实验(比如临床PCR检验实验室)室通常需要做到四区隔离(或至少是三区隔离)的要求。

　　一般常见的三区指的是：

　　1.试剂配制区：PCR反应系统配制区。

　　2.标本处理区:包括扩展模板的制备，也就是我们经常提取DNA的地方;3.PCR扩增和产品分析区域:PCR扩增区域，也是凝胶电泳分析扩增产品区域。

　　如果细分PCR扩展区和产品分析区，则为典型的四区隔离。四区隔离的主要目的是防止气溶胶在各PCR区域之间流动。为了避免相互污染，可以为不同区域设置正负压：

　　1.试剂准备区(一区):最干净的区域，保持微正压，防止外部空气进入隔离污染源。此外，阴性模板应添加PCR管并覆盖在该区域，严禁在该区域打开。储存带有DNA模板的离心管;

　　2.增加DNA模板(ⅱ区)：保持微负压，确保内部空气不泄漏，避免阳性模板的气溶胶污染外部环境。

　　3.扩增及PCR产品分析区(三区)：保持微负压，使内部空气不泄漏，避免扩增产物的气溶胶污染外部环境。

　　在进入PCR实验室时，需要遵循一个方向进行操作不能逆向进行。

　　否则，可能会产生气溶胶污染和假阳性结果!因此，在PCR实验室投入使用之前，必须先通过国家授权的检测机构进行检测，取得PCR实验室检测合格报告，然后在正常使用前进行彻底消毒。

PCR实验室污染怎么办?

　　在生物实验室中，污染总是不可能预防的，安静的，虚假的阳性结果使无数的实验室人员疯狂和崩溃。如何避免实验室污染是首要任务。大多数生物学实验都是基于细胞、分子和蛋白质水平的微观实验。这些微样本对外部环境的影响很敏感，环境中的杂质污染。试剂和仪器的交叉污染。产品气溶胶污染等，将对实验结果产生负面影响。

　　首先，我们需要了解哪些常见的污染源?

　　交叉污染样本?试剂交叉污染?克隆颗粒污染?PCR扩张产品污染?气溶胶污染。

　　如何防止PCR实验室污染？

　　(一)实验室分区合理。

　　实验室各工作区的实验用品，包括移液器，应专门使用。如果可能，PCR试剂应放置在配有紫外线灯的层流工作台(如生物安全柜和超净工作台)中。PCR专业微量离心机应放置在工作台内。一次性手套。每个范围内的液体转移器和其他必要物品。

　　(二)实验操作正确。

　　①PCR试剂和模板的操作应严格按照要求进行，样品应缓慢，尽量一次完成，避免多次吸烟，避免交叉污染或气溶胶污染。在实验过程中，手套应经常更换。进出不同区域或模板后，应及时更换手套。

　　②配备PCR试剂的微量离心管应在打开前进行瞬时离心(约10秒)，将管壁和管盖上的液体抛到管底，以减少污染手套或添加样品的机会。打开管道的动作要轻，防止管道中的液体溅出或形成气溶胶，造成污染。

　　③同时进行多个PCR反应时，应制备主反应混合物，然后将其分装到PCR反应管中。zui后，添加样品核酸模板，以减少繁琐的单次添加操作造成的污染。

　　(三)实验仪器和试剂。

　　①实验室配制的试剂，如去离子水、缓冲液等，在使用前应进行高压灭菌或过滤灭菌。

　　②单独包装PCR试剂:所有PCR试剂均应单独包装，以减少重复取样次数，并保存在-20℃。此外，PCR试剂。PCR反应液应与样品和PCR产品分开保存，不得放在同一个冰箱或冰箱中。

　　③所有吸头、反应管等应一次使用，使用前应进行高压处理。如果条件允许，最好使用带过滤器的枪头。

　　④每个工作区域的移液器要有标识，要固定使用，不能交叉使用。

　　(四)实验设计。

　　实验设计应遵循实验室内部质量控制的有关规定，至少在实验中：

　　①设置目标DNA阳性对照反应。实验前应在实验室的其他位置进行目标序列的适当稀释，以防止目标DNA的浓缩溶液被带到实验室进行PCR的特殊位置。

　　②设置PCR试剂阴性对照和目标DNA阴性对照。

　　实验室的合理设计与建设是顺利进行PCR实验的基础和保障，不合理的规划设计给后期实验的进行带来很多麻烦，从源头杜绝实验的麻烦，需要进行专业的学习。在这里提醒大家，PCR实验室检测是要有资质第三方检测公司检测，并且提供合格的检测报告，这样的实验室才能起到保护操作人员，样品的作用!